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应用假单胞菌进行防蜡作用的研究

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应用 假单胞菌 进行 作用 研究
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环境’{撤2002.8(3):302~304 006‘康从宝2王浩2刘春德1 张长铠…(1大庆子亍油学院右油1一程系 爱达 151400)(?山4、大学微生物技术国家壬点实验室济南250100)摘 要 假单胞菌茼体与其胞外产物可以作为一种很好的防蜡剂对的发酵条--{定了最适发酵培养基的配力,发酵培养基“葡萄糖、蛋白胨为j£最适诫、氮源防蜡剂生产的发酵条件为:前16 后期将温度降至20℃.发酵液的 5时为发酵终点,此时发酵液在室内条件l、的防蜡率为78%将I.述所得菌液在大庆油…做了防蜡宴验,结果表明,注入11的发酵液可以作为一种经济、有效的防蜡利图2表3参3关键词假单胞菌;微斗物采油:防蜡剂:12 S S A (。7zm 51400,:e3 k6。rⅡ衙}r…hi i 50100.he —l l of as a is to in on he of aX he he of .11 5℃0℃.一11 pH .5 of 8%.in he s —l 1 l“s lm as a ..:12原油中含有一定比例的蜡,在原油的采出过程中,随着温度、压力的降低,原油中的蜡会结结在井筒的周围。这样会严重影响原汕的开采定期洗井是常用的一种清蜡力‘式,但这种方法会影响有效采油时间,『_采用防蜡技术是通过延长洗井周期来减少清洗井的次数,从而可以提高啄汕的产量._L}是通过微牛物的代谢产物的作用,使油管内壁及抽油杆表面形成亲水膜,使蜡小容易被吸附;二是通过微生物对蜡的利用而使长链蜡被收稿¨2 4)7—24 接受00 7}}通是通过微生物产生的某些表面活性剂类物质,可以降低油水界而张力,改变蜡的蜡晶状态,阻止蜡的凝结,起到防蜡作用”’“因此,利用微牛物进行防蜡,是一种行之有效的方法我们筛选到一株假单胞菌I.一11,用其菌体及其代谢产物的混合物做防蜡剂有很好的防蜡效果.实验中发现,培养条件对此,巾文报道了对发酵条件的初步研究及其发酵液在大庆油刚矿场应用的效果.1材料和方法I.1材料1 1.1菌种 假单胞菌(离于油田的油层水万方数据3蚓 李清心等:应用假单胞茼进行防蚶仟用的矶究I.1 2原油样品 从油罔取米的原油样品要求不含化学药刺.析蜡温度(37±2)固点<32℃,经脱水后使用.1.I.3种子培养基(p/】 葡萄糖10.噩白胨2,,04 2,.5, 0 005.加水争1 L;渊I.1 4发酵培养基(p/) 葡萄糖30,蟹白晾2.Na!4 2.O。2,.5. 005,加水至J I:倜.1.1 5实验仪器 大庆产防蜡仪,海产·盯温培养箱,国产恒温水浴锅,l I.自控式发酵罐1.2方法i,2 1 种子液的制备 将茼种接人到种子培养基中.30 1:培养14 h.I 2.2防蜡剂的制备 将陌种(5%)转接到1 】‘摇床隔2 品经8层纱布过滤后,取滤液即为防蜡剂.1 2.3防蜡剂效果的测定 取一定量的原油,加人10%舫蜡刹.用大庆产防蜡仪测定防蜡率,以防蜡率的大小确定防蜡剂的效果.1 2 4油田应用试验 将井每次注入50~100 月注一次,然后检测各参数的变化.试验外区的油层平均有效厚度为9.2[11,平均孔隙度为16%,地卜 s,原油含蜡量20%.2结果与讨论2.1 不同碳源对防蜡率的影响由于实验产为油田的应片3做准备,所以选择易得日.价格较便宜的葡萄糖、玉米浆、蔗糖、淀粉和鼓皮为碳源.在发酵培养基巾,这几种碳源浓度均为30g/L,接种后置于摇床卜培养,每隔2 防蜡率从接人菌种丌蚧到发酵液防蜡率最高时这段时间定义为发酵周期.实验结果如表用葡萄糖为碳源时,防蜡率为65%,且发酵阔期为42 h,冈此我们选用葡萄楷作为发酵培养蕞的碳源.2 2不同氮源对防蜡率的影晌以P=30 g/l。的葡萄糖为碳源,分别以P=2 g/H。[:O,、尿素为发酵培养堆的氯源,每隔2 防蜡率,结果见表2.用蛋【7m 以我们选择簧由脉作为发酵培养基的氮源.表I 不同碳源对防蜡率的影响.坐! 型型!堕型!:竺生:!:生!!!竺!!竺竺竺:坐型!!!£!!竺,.碱膊 。。 。。。:慧黑:。。。.t 8m”…。‘、“%) ㈠/111—葡面丽瓦而蕊面广——F————’万——土米浆046 4(I 46蕊槠t“56 “淀粉St ()46塾星!!!!!!!竺!坚!型 业 型表2不同氮源对防蜡率的影响!!!!! 量垡!!!!!!:!!!!!!!!!!型竖!!!!!旦:竺竺!竺!!!!!!塑!!型翌生。氯豫 。。i。。。 。。兰慧芝名。.。H。㈨舻㈣“f r/%)“ C _牛丙吾_西j—168————35 4I】、H。4 48(^蝌1d 30 44c 55 46壁茎!型 塑 塑2.3培养基的初始0 g/P=2 g/I.的生白陈为氮源,将发酵培养基的初始、4.0、5 0、6.0、7 0、8,0、9 0,接种后,每隔2 防蜡率结果发现当发酵培养摹的切始时,发酵液有较女初始I】.4培养温度对防蜡率的影响选用实验中确定的最佳碳源、氯源,分刖在20、25、30、35、40屯条件下进行发酵,测定发酵液的舫蜡率结果发现培养温度在35℃以缩短发酵周期,但防蜡效果耍比低温发酵产,}的效果蔗.原因町能是存较高温度下,利J’闲休牛长,而在低温情况下,却有利于菌体产物的分泌.针对这一情况,我们采用改变温度培养的方式,即发酵过程的前16 J)使培养温度保持在35℃.然后再将培养温度降至20屯,此时防蜡率与20_℃条件下发酵产品的防蜡率一致,而且发酵周期缩短了6 装液量对防蜡率的影响装液量直接影响氧的供应情况,在1 J。的三角瓶巾分别加入100、1 50、21)0、250、300、350、400 始。置于20℃、140 r/隔2 果发现装液醴的多少并小影响发酵足,当装液鞋为300 蜡率最高,可能足冈为产物的产生对于溶氧有一定的要求万方数据血片加』发酵培养基的优化对发酵培养基进行了优化,得到最佳发酵培养基的配方为:葡萄糖40 g,蛋口胨4 g, g,04 1 g,.6 g, 0 005 g,加水至1 I.,凋发酵工艺为:发酵过程中前16 t.以后的培养温度为20℃.用此发酵培养基L—11的发酵周期为36 h,发酵液的防蜡率为75%2 7发酵终点的确定在实验所得的最佳培养条件下对I.-l 发酵液的到1),当发酵液的时.防蜡率达到最大值,因此,我们用榆测o 5 10 15 20 25发酵时间me(m)图I I.一11发酵过程中 of pH 表3防蜡剂的防蜡效果 of 洗外d t/K t/d)t/d【95【3579202198】791642763100852.8发酵所得的防蜡剂在油田中的应用将所得的防蜡剂应用于人庆采油厂,结果见袤3.使用了微生物防蜡剂后,热洗周期明显延长.针对各个实验井,微生物防蜡的特点(图2)是:油井产液8巷图2注入I,后5—5井的斗产曲线 cu/we of -5 it\v)古水量▲)平均电流一)平均产液量●)平均产油量:in—,2,3,4,5:注入后of 测电流下降;综合含水量上升;产油量稳定.虽然使用微生物法防蜡不能明显的提高原油的产量,但足却有效地延长了洗井周期,增加了i|结论用上述方法牛产的防蜡剂在人庆采油厂的矿场、试验t{,取得本降低,同时约大量水、一1效的防蜡剂.肼J 1,能进行防蜡作用的机理,仞步认为是由于过表面活性剂的作用使蜡不容易在井壁周围凝结而达到延长洗井周期的日的.但还需要作进一步的研究.春德.赵刚,罗景琪编译国外微生物提高采收率技术论丈选北京:石油工业出版社,1997 202~2142方云,夏咏梅编泽牛物表面活性剂北京:巾1日轻『一出版社.1991 5—173 M.S,S ot iⅣ000,53(5):495—509、√叫引副引到刮叫叫1]:=。雏¨踺;,.、.■一./,\一×一、.....。,l,,。a■L№~一”¨Ⅲ虾万方数据应用假单胞菌进行防蜡作用的研究作者: 李清心, 康从宝, 王浩, 刘春德, 张长铠作者单位: 李清心(大庆石油学院石油工程系,安达,151400;山东大学微生物技术国家重点实验室,济南,250100), 康从宝,王浩,张长铠(山东大学微生物技术国家重点实验室,济南,250100), 刘春德(大庆石油学院石油工程系,安达,151400)刊名: 应用与环境生物学报英文刊名: F (期): 2002,8(3)被引用次数: 1次参考文献(3条)外微生物提高采收率技术论文选 物表面活性剂 S of 3)相似文献(10条)解原油微生物的筛选及其部分特性的研究 9(6)筛选得到4株可利用原油为碳源生长的菌株,们能利用长链烷烃生长,并且能耐受一定的温度、以原油为碳源的培养基中进行培养时,可以使培养液的表面张力从72mN/m,右,清心摘)明杰 铜绿假单胞菌(重原油油藏微生物采油试验 9(2)辽河油田冷43块油藏所产原油含胶质沥青质37%~42%,含蜡5%,3 Pa*s(50℃),g/0℃的两种菌假单胞菌( 养基,分别与该区块5口油井所产原油在48℃摇床发酵48小时,使原油粘度降低26%~65%,发酵液表面张力下降10%~19%,7井次,.2 t,口井(间开井)别是微生物疏通出水层或通道,重原油油藏微生物采油试验 2001采用假单胞菌(短杆菌(混合菌群与营养剂一起注入近井地带采油,经5口特重原油油井矿场试验,表明,微生物增油降水效果显著,井增产幅度10~150﹪用微生物吞吐技术开采稠油、特稠油 5(家油田冷43块油层稠油属特稠油,50℃脱气原油粘度在10 000稠油、向前 微生物采油中油藏寡营养细菌的室内研究以及矿场试验 2007微生物采油作为一种辅助采油技术,一直受到研究人员和石油公司的关注。但以前的研究多集中传统细菌培养方面,而对占油藏90%以上的寡营养细菌知之甚少。随着新的培养方法以及分子生物学手段的应用,使得搞清油藏地层中组成复杂的微生物生态以及功能成为可能。本论文结合目前最流行的培养寡营养细菌方法和传统的16S 对青海花土沟油田降解原油的本源微生物群落进行了模拟驱油研究,和矿场趋油施工,主要研究成果:果表明:在普通环境中培养寡营养细菌的技术同样可以在油藏环境中应用。对所分离得到的寡营养细菌的降解利用原油的性能进行的试验表明,所得菌株对其栖息地原油具有很好的代谢机能。果显示该地层环境中含有较多的假单胞菌属,芽孢菌属,海细菌属以及大量寡营养细菌。这个结果表明在青海花土沟油田利用本源微生物采油具有得天独厚的优势。源寡营养微生物具有容易激活,和很好代谢原油的能力。与单纯的注水开采相比,具有明显的提高采收率的能力。活本源寡营养细菌在青海花土沟油田具有广泛的推广价值。生物表面活性剂菌油田化学2003,20(2)从胜利油田井口土壤中分离并培育出一株可产生生物表面活性剂的假单胞菌,命名为养48 等体积比的胜利河口油田一口井的原油(50℃粘度1 019 s)混合,生成O/ mN/生成的泡沫稳定性(半衰期)较商品发泡剂新咪唑啉溶液略差,但50℃时则较好,10℃热处理2 温表面张力大体维持恒定(0.5 mN/m);温表面张力基本不变(1.2 mN/m);矿化度(03~05 范围的发酵液,室温表面张力也基本不变(0.3 ),05时小幅上升至33.3 mN/量为2.1 g/L,用温时其临界胶束浓度仅为36藏微生物群落结构的分子分析 5(9)利用术考察本源微生物驱油前后,以要成分为淀粉纤维素)为唯一营养剂、培养温度为48℃时,在有氧或厌氧务件下,24 、梭状芽孢杆菌(和烃类降解菌(经分析,原始底层注入水中虽然含有对驱油不利的脱硫肠状菌属(但是在经单胞菌北京大学学报(自然科学版)2003,39(6)假单胞菌临界胶束浓度(36 ,可以将水的表面张力由72 mN/m,油水界面张力由30 mN/ mN/研究表明,秀丽 质粒在微生物采油中作用的探索 2001通过三种质粒快速检测方法,从150株降解石油烃的细菌中筛选出一株含有质粒的16定为假单胞菌属(,带质粒的16气、对长链脂肪烃的降解、乳化活性进行了对比分析,发现16脂的脂肪酸均为18碳酸,,,16烃菌16气性能无直接相关性,面活性剂合成的部分基因可能由质粒所控制,条)单胞菌刊论文]然科学版)2003(6)本文链接::长江大学(授权号:010年7月16日
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